細(xì)胞內(nèi),每時每刻都上演著DNA與DNase的戰(zhàn)爭。雖然大多時候都是以DNA的分崩離析告終,但千萬別只在意表面的激烈,卻忽略了背后的重大意義。
可能您不太了解DNase, 這事得從頭說起。脫氧核糖核酸酶(deoxyribonuclease, DNase)按照功能可分為水解酶,解旋酶,連接酶以及聚合酶等。
A、
DNA水解酶:DNA酶一般就是指DNA水解酶,意義同DNase。用于切斷磷酸二酯鍵的酶,這些酶使糖-磷酸酯主鏈上的磷酸二酯鍵水解。一般分為兩種:外切核酸酶和內(nèi)切核酸酶。
★ 外切核酸酶是一類從多核苷酸鏈的一端開始按序催化水解3,5-磷酸二酯鍵,降解核苷酸的酶。其水解的最終產(chǎn)物是單個的核苷酸。按作用的特性差異可以將其分為單鏈的核酸外切酶和雙鏈的核酸外切酶。
★ 內(nèi)切核酸酶是一類可水解分子鏈內(nèi)部磷酸二酯鍵生成寡核苷酸的酶,與外切核酸酶相對應(yīng)。按底物的特異性可分為DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶。簡單介紹下內(nèi)切酶中的兩位佼佼者:
● DNaseⅠ:中文名稱為脫氧核糖核酸酶Ⅰ,從牛胰腺純化得到的DNaseⅠ是一種消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的內(nèi)切核酸酶。
DNaseⅠ應(yīng)用于1)制備不含DNA的RNA樣品;2)去除基因組DNA等污染;3)體外RNA轉(zhuǎn)錄后去除DNA模板;4)足跡法分析DNA-蛋白質(zhì)相互作用;5)與DNA PolymeraseⅠ一起用于切口平移;6)產(chǎn)生DNA隨機片段文庫等
● 限制性核酸內(nèi)切酶:由細(xì)菌產(chǎn)生的限制性核酸內(nèi)切酶只能識別DNA特定的分子序列,是一類從DNA分子中間水解磷酸二酯鍵,從而切斷雙鏈DNA的核酸水解酶。不同于一般的DNase,它們的切點大多很嚴(yán)格,要求專一的核苷酸順序——限制酶位點。
限制性核酸內(nèi)切酶應(yīng)用于1)DNA基因組物理圖譜的組建;2)基因定位和基因分離;3)DNA分子堿基序列分析;4)相關(guān)的DNA分子和遺傳工程。
B、
DNA解旋酶:是一類解開氫鍵的酶,一般在DNA復(fù)制過程中起到催化雙鏈DNA解旋的作用。
C、
DNA連接酶:一種將已有的兩個DNA片段連接成為一條DNA鏈的酶。
D、
DNA聚合酶:以已有的核酸序列作為模板,將4種脫氧核苷酸(A、T、G、C)按照模板的堿基排列順序,以“堿基互補原則”依次連接,聚合成為一條新的DNA鏈。小達(dá)君提供以下幾種常用的DNA聚合酶:
這么看來DNase也不完全充當(dāng)著反派角色,在DNA復(fù)制過程及分子實驗中也有著重要的作用呢!
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